差速離心技術(shù)
差速離心是指低速與高速離心交替進(jìn)行,使各種沉降系數(shù)不同的顆粒先后沉淀下來(lái),達(dá)到分離的目的。沉降系數(shù)差別在一個(gè)或幾個(gè)數(shù)量級(jí)的顆粒,可以用此法分離。樣品離心時(shí),在同一離心條件下,沉降速度不同,通過(guò)不斷增加相對(duì)離心力,使一個(gè)非均勻混合液內(nèi)的大小、形狀不同的粒子分部沉淀。操作過(guò)程中一般是在離心后用傾倒的辦法把上清液與沉淀分開(kāi),然后將上清液加高轉(zhuǎn)速離心,分離出第二部分沉淀,如此往復(fù)加高轉(zhuǎn)速,逐級(jí)分離出所需要的物質(zhì)。
差速離心方法較簡(jiǎn)單,但分辨率不高,沉淀系數(shù)在同一個(gè)數(shù)量級(jí)內(nèi)的各種粒子不容易分開(kāi),常用于其他分離手段之前的粗制品提取。
例如用差速離心法分離已破碎的細(xì)胞各組份
離心力與離心機(jī)轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)換公式:
式中,RCF(relative centrifugal force)表示相對(duì)離心力,X為離心轉(zhuǎn)子的半徑距離,以cm為單位;g為地球重力加速度(980cm/sec2);n為轉(zhuǎn)子每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù)(rpm)。
RCF(relative centrifugal force,相對(duì)離心力),由于各種離心機(jī)轉(zhuǎn)子的半徑或者離心管至旋轉(zhuǎn)軸中心的距離不同,離心力而受變化,因此在文獻(xiàn)中常用“相對(duì)離心力”或“數(shù)字×g”表示離心力,只要RCF值不變,一個(gè)樣品可以在不同的離心機(jī)上獲得相同的結(jié)果。
RCF就是實(shí)際離心場(chǎng)轉(zhuǎn)化為重力加速度的倍數(shù)。
圖2離心力與離心機(jī)轉(zhuǎn)數(shù)的轉(zhuǎn)換列線圖